小鼠小膠質(zhì)BV2由小鼠小神經(jīng)膠質(zhì)細胞經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)染v-raf/v-myc獲永生化。BV-2細胞保留有小神經(jīng)膠質(zhì)細胞多種形態(tài)、表征和功能特征；免疫組化結(jié)果顯示，BV-2細胞為MAC1、MAC2陽性；而MAC3、膠質(zhì)細胞原纖維酸性蛋白、半乳糖腦苷脂為陰性。

　　小鼠小膠質(zhì)BV2“一代”指從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間，與細胞世代或倍增不同。在一代中，細胞培增3～6次。細胞傳代后，一般經(jīng)過三個階段：游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細胞分裂指數(shù)表示細Chemicalbook胞增殖的旺盛程度，即細胞群的分裂相數(shù)／100個細胞。一般細胞分裂指數(shù)介于0.2％～0.5％，腫瘤細胞可達3～5％。接種2～3天分裂增殖旺盛，是活力較好時期，稱指數(shù)增生期(對數(shù)生長期)，適宜進行各種試驗。

　　小鼠小膠質(zhì)BV2的操作流程：

　　1、您收到BV2小鼠小膠質(zhì)細胞后，請按照以下方法進行操作：

　　取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。

　　2、細胞傳代：

　　1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

　　2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

　　3）棄上清，沉淀細胞用12ml培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，最后放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

　　4）待細胞貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。

　　3、細胞凍存：

　　1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

　　2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

　　3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

　　4）先將細胞凍存管放置于-20℃1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

　　4、細胞復(fù)蘇：

　　1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

　　2）將凍存管中的細胞移至含5ml培養(yǎng)基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；

　　3）棄上清，沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

　　4）第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。